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化學發(fā)光法（子發(fā)光光譜分析法中的一類）

次瀏覽 | 更新時間：2023-05-19

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化學發(fā)光法

子發(fā)光光譜分析法中的一類

化學發(fā)光（ChemiLuminescence，簡稱為CL）法是分子發(fā)光光譜分析法中的一類，它主要是依據(jù)化學檢測體系中待測物濃度與體系的化學發(fā)光強度在一定條件下呈線性定量關系的原理，利用儀器對體系化學發(fā)光強度的檢測，而確定待測物含量的一種痕量分析方法。化學發(fā)光法在痕量金屬離子、各類無機化合物、有機化合物分析及生物領域都有廣泛的應用。

基本信息

中文名	化學發(fā)光法
外文名	ChemiLuminescence method
學科	分析化學
類別	自然現(xiàn)象
性質	分子發(fā)光光譜分析法中的一類
行業(yè)應用	痕量金屬離子、各類無機化合物等
簡稱	CL

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基本原理

化學發(fā)光與其它發(fā)光分析的本質區(qū)別是體系產(chǎn)生發(fā)光（光輻射）所吸收的能量來源不同。體系產(chǎn)生化學發(fā)光，必須具有一個產(chǎn)生可檢信號的光輻射反應和一個可一次提供導致發(fā)光現(xiàn)象足夠能量的單獨反應步驟的化學反應。

化學發(fā)光法分類

依據(jù)供能反應的特點，可將化學發(fā)光分析法分為：

1）普通化學發(fā)光分析法（供能反應為一般化學反應）；

2）生物化學發(fā)光分析法（供能反應為生物化學反應；簡稱BCL）；

3）電致化學發(fā)光分析法（供能反應為電化學反應，簡稱ECL）等。

根據(jù)測定方法該法又可分為：

1）直接測定CL分析法；

2）偶合反應CL分析法（通過反應的偶合，測定體系中某一組份）；

3）時間分辨CL分析法（即利用多組份對同一化學發(fā)光反應影響的時間差實現(xiàn)多組份測定）；

4）固相、氣相、液相CL分析法；

5）酵聯(lián)免疫CL分析法等。

常用發(fā)光劑及原理

化學發(fā)光是某種物質分子吸收化學能而產(chǎn)生的光輻射。任何一個化學發(fā)光反應都包括兩個關鍵步驟，即化學激發(fā)和發(fā)光。因此，一個化學反應要成為發(fā)光反應，必須滿足兩個條件：第一：反應必須提供足夠的能量（170～300KJ/mol），第二，這些化學能必須能被某種物質分子吸收而產(chǎn)生電子激發(fā)態(tài)，并且有足夠的熒光量子產(chǎn)率。到目前為止，所研究的化學發(fā)光反應大多為氧化還原反應，且多為液相化學發(fā)光反應。

化學發(fā)光反應的發(fā)光效率是指發(fā)光劑在反應中的發(fā)光分于數(shù)與參加反應的分子數(shù)之比。對于一般化學發(fā)光反應，值約為10，較典型的發(fā)光劑，如魯米諾，發(fā)光效率可達0.01，發(fā)光效率大于0.01的發(fā)光反應極少見。現(xiàn)將幾種發(fā)光效率較高的常用的發(fā)光劑及其發(fā)光機理歸納如下。

魯米諾及其衍生物

魯米諾的衍生物主要有異魯米諾、4—氨基已基—N—乙基異魯諾及AHEI和ABEI等。魯米諾在堿性條件下可被一些氧化劑氧化，發(fā)生化學發(fā)光反應，輻射出最大發(fā)射波長為425nm的化學發(fā)光。

在通常情況下魯米諾與過氧化氫的化學發(fā)光反應相當緩慢，但當有某些催化劑存在時反應非常迅速。最常用催化劑是金屬離子，在很大濃度范圍內，金屬離子濃度與發(fā)光強度成正比，從而可進行某些金屬離子的化學發(fā)光分析，利用這一反應可以分析那些含有金屬離子的有機化合物，達到很高的靈敏度。其次是利用有機化合物對魯米諾化學發(fā)光反應的抑制作用，測定對化學發(fā)光反應具有猝滅作用的有機化合物。其三是通過偶合反應間接測定無機或有機化合物。其四是將魯米諾的衍生物如異魯米諾（ABEI）標記到羧酸和氨類化合物上，經(jīng)過高效液相色譜或液相色譜分離后，再在堿性條件下與過氧化氫－鐵氰化鉀反應進行化學發(fā)光檢測。也可以采用其它分離方法，如將新合成的化學發(fā)光試劑異硫氰酸異魯米諾標記到酵母RNA后，通過離心和透析分離，然后進行化學發(fā)光檢測。此外應用的還有N2（B2羧基丙酰基）異魯米諾，并對其性能進行了研究。

光澤精

光澤精以硝酸鹽的形式存在，在堿性介質中，過氧化氫將其氧化成四元環(huán)過氧化物中間體，而后裂解生成激發(fā)態(tài)的吡啶酮而發(fā)光。利用光澤精與還原劑作用，可用于測定臨床醫(yī)學上一些重要的還原性物質，如抗壞血酸、肌酸酐、谷胱甘肽、葡萄糖醛酸、乳糖、葡萄糖。

洛粉堿

洛粉是文獻上記載最早的化學發(fā)光試劑，但卻遲遲未得到應用，直到1979年Marino等人將它應用于Co的測定后才得到重視。此試劑已被用于多種元素的分析測定。

過氧化草酸酯類

草酸鹽類化學發(fā)光反應大都生成過氧草酰中間體，因此這類反應亦稱過氧草酰類化學發(fā)光反應。過氧草酸鹽類化學發(fā)光分析應用的推廣還有賴于新的熒光衍生試劑的開發(fā)。

吖啶酯類

McCapr等合成了一系列吖啶酯類化合物，對該類試劑的化學發(fā)光機理研究表明，發(fā)光效率與試劑中的可解離酸性基團的pKa有密切關系，pKa一般應小于11。吖啶酯類化合物是一類很有前途的非放射性核酸探針標記物，用作DNA的發(fā)光探針，發(fā)光量子產(chǎn)率高，穩(wěn)定性好，標記物對雜交反應的動力學和雜交體的穩(wěn)定性無影響，可以直接在堿性介質中進行化學發(fā)光反應。

以上五種化學發(fā)光劑化學發(fā)光量子產(chǎn)率高，水溶液穩(wěn)定，能被多種氧化劑直接氧化而發(fā)光，也可被眾多的金屬高于催化發(fā)光反應而發(fā)光，許多無機、有機和生化組分也能增強或抑制其發(fā)光，因此應用十分廣泛。目前報道的有鄰菲咯啉，堿基水楊酸、羅明丹—B、沒食子酸、香豆素、皮素，茜素紫、蘇木色精，培花青，三苯甲烷類染料，丙酮、乙醇、羥胺等。這些試劑商品化程度高，價廉，使用方便，但化學發(fā)光量子產(chǎn)率較低，因此，研究增敏試劑來提高它們的化學發(fā)光量子產(chǎn)率是非常關鍵的。

化學發(fā)光法的應用

無機化合物化學發(fā)光分析

化學發(fā)光法在無機化合物化學發(fā)光分析中的應用如下表所示：