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可溶性蛋白質(zhì)（篩選抗性的指標(biāo)之一）

次瀏覽 | 更新時(shí)間：2023-05-23

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可溶性蛋白質(zhì)

篩選抗性的指標(biāo)之一

可溶性蛋白是重要的滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)和營養(yǎng)物質(zhì)，他們的增加和積累能提高細(xì)胞的保水能力，對(duì)細(xì)胞的生命物質(zhì)及生物膜起到保護(hù)作用，因此經(jīng)常用作篩選抗性的指標(biāo)之一。

基本信息

中文名	可溶性蛋白質(zhì)
外文名	Soluble protein
拼音	kerongxingdanbaizhi
特點(diǎn)	以小分子狀態(tài)溶于水或其他溶劑
應(yīng)用	植物生理、微生物
實(shí)驗(yàn)	考馬斯亮藍(lán)G-250法

收起

解釋

可溶性蛋白指可以以小分子狀態(tài)溶于水或其他溶劑的蛋白。通常在植物生理、微生物、食品加工等實(shí)驗(yàn)中作為重要指標(biāo)。如可溶性蛋白是植物抗旱性的重要指標(biāo)之一。

測定

原理

考馬斯亮藍(lán)G－250(GooMAssIe BrIllIAnT Blue G－250)測定蛋白質(zhì)含量屬于染料結(jié)合法的一種。考馬斯亮藍(lán)G－250在游離狀態(tài)下呈紅色，在稀酸溶液中，當(dāng)它與蛋白質(zhì)的疏水區(qū)結(jié)合后變?yōu)榍嗌罢咦畲蠊馕赵?65nM，后者在595nM。在一定蛋白質(zhì)濃度范圍內(nèi)(1～100μg)，蛋白質(zhì)與色素結(jié)合物在595nM波長下的光吸收與蛋白質(zhì)含量成正比，故可用于蛋白質(zhì)的定量測定。蛋白質(zhì)與考馬斯亮藍(lán)G－250結(jié)合在2Min左右的時(shí)間內(nèi)達(dá)到平衡，完成反應(yīng)十分迅速，其結(jié)合物在室溫下1H內(nèi)保持穩(wěn)定。該反應(yīng)快速靈敏(靈敏度比FolIn－酚法還高4倍)、易于操作、干擾物質(zhì)少(考馬斯亮藍(lán)G－250和蛋白質(zhì)通過范德華力結(jié)合，受蛋白質(zhì)的特異性影響較小，除組蛋白外，其他不同種類蛋白質(zhì)染色強(qiáng)度差異不大)，可測定微克級(jí)蛋白質(zhì)含量，是一種比較好的蛋白質(zhì)定量法。但此方法也存在其缺點(diǎn)，考馬斯亮藍(lán)在蛋白質(zhì)含量很高時(shí)線性關(guān)系偏低，且不同來源蛋白質(zhì)與色素結(jié)合狀況有差異。

儀器與用具

721分光光度計(jì)；10Ml量筒1個(gè)；研缽；燒杯；量瓶；移液管：1Ml 3支，0?1Ml 3支；10Ml具塞刻度試管14支。

試劑

標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液：用牛血清白蛋白配成含蛋白質(zhì)100μg/Ml的標(biāo)準(zhǔn)蛋白溶液;

90%乙醇；

85%磷酸(W/V)；

考馬斯亮藍(lán)G－250溶液：稱取100μg考馬斯亮藍(lán)G－250，溶于50Ml 90%乙醇中，加入85%的磷酸100Ml，最后用蒸餾水定容到1000Ml，貯放在棕色瓶中，此溶液在常溫下可放置1個(gè)月。

操作方法

1?標(biāo)準(zhǔn)曲線(蛋白質(zhì)含量為0～100μg/Ml)的繪制　取6支具塞試管，按表2－1數(shù)據(jù)配制含0～100μg/Ml的牛血清蛋白質(zhì)液各1Ml。

表2－1不同蛋白質(zhì)含量的牛血清蛋白質(zhì)液配制表

管號(hào)123456蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)液（ml)00.200.400.600.801.00蒸餾水（ml)1.000.800.600.400.200蛋白質(zhì)含量（μg）020406080100在每支試管中加入5Ml考馬斯亮藍(lán)G－250溶液，蓋塞，反轉(zhuǎn)混合數(shù)次，放置2Min后，用1CM光徑比色杯在595nM下比色。以蛋白質(zhì)濃度為橫坐標(biāo)，以吸光值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2.樣品提取液中蛋白質(zhì)濃度的測定　吸取樣品提取液1.0Ml(樣品提取見LoWry法)，放入具塞試管中(每個(gè)樣品設(shè)置兩個(gè)重復(fù))，加入5Ml考馬斯亮藍(lán)G－250溶液，充分混合，放置2Min后在595nM下比色，記錄吸光值，并通過標(biāo)準(zhǔn)曲線查得蛋白質(zhì)含量。

3.結(jié)果計(jì)算

樣品中蛋白質(zhì)的含量(Mg/g)=C×VTV1×FW×1000（2-2）

式中C：查標(biāo)準(zhǔn)曲線值(μg)；VT：提取液總體積(Ml)；

FW：樣品鮮重(g)； V1：測定時(shí)加樣量(Ml)。

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